L’observation microscopique est une technique utilisée dans divers domaines scientifiques pour visualiser des détails invisibles à l’œil nu. Cependant, savoir comment effectuer correctement la mise au point d’un microscope est essentiel pour tirer le meilleur parti de cette technologie. Dans cet article, nous allons vous guider à travers les étapes fondamentales de la mise au point et vous fournir des conseils pratiques pour garantir une image précise et claire de vos échantillons.
En quoi consiste la mise au point d’un microscope ?
Mettre au point un microscope, c’est régler les lentilles pour obtenir une image claire et précise de l’échantillon observé. Ce processus implique de moduler la distance entre les lentilles de l’objectif et l’échantillon via les boutons de mise au point. Les microscopes sont généralement équipés de deux types de réglages : la mise au point grossière et la mise au point fine. La mise au point grossière permet d’éloigner ou de rapprocher rapidement l’objectif de l’échantillon pour une image initiale, tandis que la mise au point fine permet des ajustements plus précis pour affiner les détails.
Une mise au point adéquate est cruciale pour examiner avec précision les structures microscopiques, qu’il s’agisse d’études biologiques, médicales ou de recherches scientifiques. Sans une bonne mise au point, les observations risquent d’être floues et de manquer de détails essentiels.
Pour régler l’axe optique
Pour ajuster l’axe optique d’un microscope inversé, suivez ces étapes :
- Déplacez le levier du diaphragme à iris d’ouverture sur le condenseur vers l’extrême gauche pour ouvrir complètement le diaphragme ;
- Déplacez également le levier du diaphragme à iris de champ situé sur le montant d’éclairage, vers la position la plus à gauche pour ouvrir le diaphragme ;
- Utilisez l’objectif 10X pour mettre au point sur l’échantillon ;
- Déplacez légèrement le levier du diaphragme à iris de champ vers la droite pour rétrécir le diaphragme afin que son image soit visible dans le champ de vision ;
- Tournez la poignée du condenseur pour ajuster la mise au point sur l’image du diaphragme à iris de champ, jusqu’à ce que le polygone soit clairement visible ;
- Insérez les deux tournevis hexagonaux dans les trous des vis de réglage. Tournez les vis de centrage du condenseur pour positionner l’image au centre du champ de vision ;
- Ouvrez le levier du diaphragme à iris de champ jusqu’à ce que l’image soit juste hors du champ de vision.
Pour régler la distance interpupillaire
Pour ajuster la distance interpupillaire, modifiez l’écart entre les oculaires selon la distance entre vos yeux. Un réglage correct vous permet de voir une image claire à travers les oculaires. Si vous voyez deux images en regardant dans les oculaires, cela signifie que la distance interpupillaire doit être ajustée.
Voici les étapes à suivre pour ajuster la distance interpupillaire sur un stéréomicroscope :
- Placez vos yeux à la bonne position du point oculaire tout en fixant votre regard sur l’échantillon. Pour une observation confortable, assurez-vous que vos yeux sont à une certaine distance des oculaires. Si vous portez des lunettes, vérifiez qu’elles touchent légèrement les verres des oculaires. Si vous observez à l’œil nu, positionnez vos yeux contre les œilletons en caoutchouc fixés aux oculaires.
- Élargissez ou réduisez horizontalement la distance entre les oculaires gauche et droit pour que les champs de vision gauche et droit se fondent en une seule image centrée. Approchez vos yeux des oculaires tout en observant cette image unifiée. Répétez cet ajustement jusqu’à ce que le champ de vision soit uniforme pour l’œil droit, l’œil gauche et les deux yeux.
Le réglage dioptrique
Le réglage dioptrique corrige la différence entre les champs de vision droit et gauche, minimisant ainsi le changement de mise au point lorsque les objectifs sont changés. Étant donné que la correction dioptrique peut varier d’une personne à l’autre, il est important d’effectuer ce réglage individuellement pour chaque utilisateur du microscope.
Pour ajuster la dioptrie sur un microscope inversé, suivez ces étapes :
- Réglez l’échelle de la bague de réglage de la dioptrie des deux côtés sur la position « 0 » ;
- Insérez un objectif à faible grossissement (par exemple, 10X) dans le chemin optique. Regardez dans l’oculaire droit avec votre œil droit et effectuez la mise au point sur l’échantillon en utilisant la poignée de réglage grossier ;
- Insérez à nouveau un objectif à faible grossissement (par exemple, 10X) dans le chemin optique. Tout en observant l’échantillon avec l’œil droit, tournez uniquement la bague de réglage de la dioptrie sur le côté droit pour mettre l’échantillon au point ;
- Regardez dans l’oculaire gauche avec l’œil gauche et tournez uniquement la bague de réglage de la dioptrie sur le côté gauche (côté oculaire) pour mettre l’échantillon au point.
Pour régler la bague de correction sur un objectif
Sur un objectif, la bague de correction joue un rôle crucial dans la réduction de l’aberration sphérique qui peut affecter la netteté de l’image observée en raison des variations dans le fond du récipient d’échantillon. Cette aberration peut rendre l’image floue et altérer la qualité des observations microscopiques. Ajuster la bague de correction permet de compenser ces effets indésirables, assurant ainsi une meilleure précision et une netteté optimale lors de l’examen des échantillons au microscope.
Certains objectifs sont spécifiquement conçus pour une épaisseur standard de récipient de 1,5 mm, correspondant à l’épaisseur typique d’une lamelle. Lorsque la bague de correction de l’objectif est réglée à 1,5, il est optimal que l’épaisseur totale du fond de la plaque de montage et du récipient soit exactement de 1,5 mm. Ce réglage précis permet d’exploiter pleinement les capacités de l’objectif, assurant une qualité d’image optimale et minimisant toute aberration qui pourrait résulter d’une épaisseur inadéquate du récipient.
Pour respecter ces exigences spécifiques d’épaisseur, il est crucial de sélectionner avec soin une plaque thermique adaptée au récipient de votre échantillon. Par exemple, pour une boîte de Pétri en plastique d’une épaisseur de 1 mm, optez pour une plaque thermique de 0,5 mm d’épaisseur. Pour une boîte de Pétri avec un fond en verre d’une épaisseur de 0,17 mm, choisissez une plaque chauffante de 1,3 mm d’épaisseur.
De plus, ajustez la bague de correction de l’objectif en fonction de l’épaisseur combinée de la plaque thermique et du récipient pour optimiser la qualité d’image. Ce réglage précis contribue à minimiser les aberrations optiques et à assurer des observations nettes et précises sous le microscope.
Pour régler la parfocalité du zoom
Le réglage de la parfocalité du zoom permet d’éviter les problèmes de mise au point lors du changement de grossissement, passant ainsi facilement d’un faible à un fort grossissement. Un réglage correct assure que la mise au point reste constante, même en changeant de grossissement, ce qui est particulièrement utile pour des tâches comme l’examen des ovocytes. Cette pratique ne simplifie pas seulement les ajustements fréquents de mise au point, elle améliore aussi l’efficacité globale du travail en laboratoire.
Voici les étapes à suivre pour régler la mise au point du zoom sur un stéréomicroscope :
- Commencez par ajuster la poignée du zoom vers le réglage du grossissement minimum et utilisez la poignée de déplacement grossier pour effectuer la mise au point ;
- Progressivement, déplacez la poignée du zoom vers le réglage du grossissement maximum tout en utilisant la poignée de réglage fin pour affiner la mise au point à chaque étape. Assurez-vous que la mise au point est précise lorsque vous atteignez le grossissement maximal ;
- Revenez à la poignée du zoom réglée sur le côté du faible grossissement. Si l’image n’est pas nette, ajustez la bague de réglage dioptrique des oculaires gauche et droit pour effectuer la mise au point ;
- Ensuite, déplacez à nouveau la poignée du zoom vers le côté du grossissement maximal et vérifiez que l’image est nette. Si ce n’est pas le cas, répétez les étapes précédentes. Le réglage de la mise au point du zoom est considéré comme terminé lorsque les grossissements minimum et maximum sont parfaitement nets ;
- Ajustez la distance interpupillaire pour que les deux yeux voient un seul champ de vision uni.
Vous avez l’essentiel à présent pour assurer la mise au point correcte et le réglage approprié de votre miscropique. En maîtrisant ces ajustements, vous êtes certain de maximiser la clarté et la précision de vos observations.
